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组培知识

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植物组织培养快速繁殖 —— 外植体接种

外植体的接种，是将经过表面灭菌的植物材料切碎或分离出器官/组织，转接到无菌培养基上进行诱导培养的过程，是建立无菌培养物的关键环节。

1. 完整操作流程

2. 无菌操作关键要点

外植体接种的核心是避免菌类污染，需严格遵守以下要求：

（1）环境与设备准备

· 接种前 4 天：用消毒药品熏蒸接种室，并打开紫外灯杀菌，设定好臭氧消毒机的灭菌时间。
· 接种前 20 分钟：打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯。

（2）人员操作规范

· 进入接种室前：用肥皂水洗手，在缓冲间内换上经灭菌的白色工作服，戴上口罩，并换上拖鞋；操作前再用 75% 酒精擦洗双手。
· 操作过程：用 75% 酒精擦拭双手和台面；禁止不必要的谈话和咳嗽，戴好口罩，避免飞沫污染。

（3）工具灭菌

· 先用酒精棉球擦拭，再通过接种工具灭菌器高温320度，灭菌12秒，冷却后使用。

（4）防污染细节

· 打开瓶子或试管时，瓶口应拿成斜角，避免灰尘落入瓶中。
· 工具用后及时灭菌，避免交叉污染。
· 接种完毕后，及时清理工作台，保持环境整洁。

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