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组培知识

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笹之雪的组织培养与快速繁殖&附培养基配方

一、材料类别
茎尖和叶片
二、培养条件
诱导培养基:MS+BA2.0mg/L+NAA0.2 mg/L
增殖培养基:MS+BA0.5mg/L+NAA0.2 mg/L+KT1.0 mg/L
生根培养基:MS+ KT1.5mg/L+NAA0.5mg/L
所有培养基均附加30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂,pH5.8。培养温度为(25±2)℃,除叶片诱导的前15d采用暗培养外,其他阶段均以日光灯为光源进行光照培养,每天连续光照10~12h,光照强度为30~40µmol·m-2·s-1
三、材料与方法
以笹之雪的幼嫩侧芽为材料,自来水冲洗干净,饱和洗衣粉水浸泡 5~10min,流水冲洗1h,移到超净工作台上用75%的酒精消毒30s,无菌水冲洗1~2次,再用0.2%升汞消毒5min(滴加2~3滴吐温-80),然后用无菌水冲洗4~5次,每次冲洗时间2~3min,无菌滤纸吸干水分。剥下材料外围的 2~3张叶片(每片叶平均分成叶顶、叶中、叶基三部分)和带有1 个小叶的茎尖。
四、炼苗与移栽
待试管苗长至2~3cm高、根长2~3cm时即可以炼苗。选取生长健壮的植株,室温下瓶内培养3d后打开瓶盖炼苗2~3d,小心地将试管苗从瓶中取出,用自来水洗净根部的培养基,移栽到已消毒过的泥碳土中。应注意遮荫, 控制好温湿度,成活率达 80%
 
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