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组培应用之茎尖脱毒(二)
3 茎尖培养的关键技术环节
要提高茎尖培养成苗率和脱毒必须掌握下列关键环节
(1)剥取适当大小的茎尖通常培养茎尖越小,产生幼苗的无毒率越高,而成活率越低。不同病毒种类去除的难易程度不同。因此需针对不同的病毒种类,培养适宜大小的茎尖。例如剥离培养带一个叶原基的生长点产生的马铃薯植株,可去处全部马铃薯卷叶病毒,去除80%Y病毒和A病毒,去除0.2%X病毒。马铃薯病毒去除从易到难的顺序是:马铃薯卷叶病毒、马铃薯A病毒、马铃薯Y病毒、奥古巴病毒、马铃薯M病毒、马铃薯X病毒、马铃薯S病毒和纺锤块茎类病毒。对于同一种病毒,剥离茎尖越小,脱毒率越高。大蒜带1个叶原基的茎尖产生苗中84%检测不到病毒,而带2-3个叶原基的无毒株率仅59%。因此,一般剥离带1-2个叶原基的茎尖即可获得较好的脱毒效果。对于难脱除的病毒则应配合采用其他措施。
(2)选用正确的培养基
培养基由大量元素(无机盐)、微量元素、有机成分、植物激素、糖和琼脂调配而成。一般铵盐及钾盐浓度高,有利于茎尖成活,反之则有利于生根或根生长,植物激素对茎尖的生长和发育有重要作用。植物细胞分裂素类如6-BA有利于长芽,而生长素类NAA有利于生根。不同品种对激素的反应不同。
(3)适宜的环境条件
大蒜、马铃薯、草莓接种后置温度23-25℃,光照1000-3000LX,每日照光13-16h。甘薯茎尖培养需温度较高,约26-32℃,光强和照光时间同马铃薯和大蒜。
(4)茎尖接种后的生长及调节方法
茎尖接种后的生长情况主要有4种。1、生长正常,生长点伸长,基本无愈伤组织形成,1-3 周内形成小芽,4-6周长成小植株。2、生长停止,接种物不扩大,渐变褐色,至枯死。此情况多因剥离操作过程中茎尖受伤。3、生长缓慢,接种物扩大缓慢,渐转绿,成一绿点。说明培养条件不适应,要迅速转入高激素浓度培养基,并适当提高培养温度。4、生长过速,生长点不伸长或略伸长,大量疏松愈伤组织形成,需转入无激素培养基或采取降低培养温度等措施。