1.植物简介
五鹤续断属于川续断科植物(Dipsacus asper),其药用部位为干燥根,是川续断中的优质品,具有补肝益肾,续接筋骨,抗骨质疏松,止血安胎等功效,临床上主要用于治疗腰膝酸软,跌打损伤,骨折,腰椎骨质增生,先兆性流产和习惯性流产等症状。
2.培养基及培养条件
初代培养基为MS+6-BA1. 5mg/L+NAA0. 1mg/L;
丛生芽培养基为MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 6mg/L;
生根培养基为1/2MS+IBA0. 4mg/L+PP3330. 4mg/L。
培养条件:所有MS培养基中均添加6. 0 g/L琼脂和20 g/L蔗糖, pH在灭菌前调至6. 0~6. 1。培养条件均为温度23~25℃、光照强度40μmol·m-2·s-1、光照时间12h/d。
3.材料和方法
挑选健壮的五鹤续断植株,取其茎尖、幼嫩的茎和叶作为外植体,用洗洁精清洗干净后,流水冲洗2h,用滤纸吸去多余的水分,在超净工作台上用75%的酒精中消毒30s左右,用无菌水冲洗3遍,再转入0. 1%的升汞溶液中振荡消毒:茎尖6min、茎8min、叶6min,无菌水冲洗3次,然后置于无菌培养皿中,切除药液接触过的伤口并剥去茎的外表皮,切成0. 5cm长的小段,叶切成0. 5cm见方的正方形,接种于初代培养基上。
4.生长及分化
在初代培养基上的诱导率可达92%,待丛生芽长至一定高度可将其转至丛生芽培养基中,待苗子长至一定高度即可进行生根。
5.炼苗移栽
将生根后的芽苗长到高5~6cm、根长约3cm时开始炼苗。先打开培养瓶盖,置于室温散射光下,补加适当的蒸馏水进行炼苗。炼苗3~4d后取出试管苗,洗去根部培养基,移栽入装有灭过菌的草炭:蛭石(2:1)的花盆中,并适时浇以霍格兰营养液,放入温室中培养,湿度保持90%左右,三周后移栽。移栽后每天至少两次喷洒适量水(土润湿为止),移栽后的小苗注意保湿、遮荫和适当通风,小苗成活率可达85%以上。
6.意义
本研究用茎尖及多种外植体为材料,旨在解决品种退化问题,保证道地药材的品质并为其扩大种植提供一条有效途径,同时还为进一步采用生物技术进行多倍体诱导作好技术准备。