16．在初代培养阶段，成功地诱导出绿色的愈伤组织；进行继代培养时愈伤组织增殖很快，却始终没有出芽，如何解决不产生不定芽的问题？ 
答：愈伤组织诱导成功后，如何有效地诱导出不定芽是相当重要的。外植体产生愈伤组织的时间和愈伤生长的程度，随不同植物种类和培养条件有较大的差异。有些植物形成不定芽比较容易，能够直接从外植体受伤的或没有受伤的部位分化出不定芽。一般认为细胞分裂素/生长素的比值是控制器官发生的重要因素，调整他们的适当比值就可以有效的控制愈伤组织的芽、根等器官的分化。在此理论下，愈伤组织诱导不定芽的能力，与愈伤组织的状态密切相关，能够诱导形成分生细胞团至关重要，分生细胞排列较为规律，较大的在外，越向内细胞越小，排列也越紧密，细胞质浓厚，核相对较大，这样的分生细胞在激素比值调控的情况下，就很容易形成不定芽。这也就是为什么愈伤组织在继代的时候要交替使用不同激素的原因。
17．NAA和2，4-D哪个生长素促进愈伤诱导效果更好？
答:对于愈伤诱导和增殖来说，2，4－D效果要比NAA明显；但有一个问题，很
多情况下，2，4－D诱导的愈伤比较难以再生芽。
18．灭完菌，凝固好的培养基上面会有一层水是什么原因？如果将植物材料转接于这样的培养基中，会有什么后果？
答：培养基灭过菌后或多或少会有积水现象，一般来说冬天要轻一些。如果积水太多接种的时候倒出来，不然容易造成容器壁水珠比较多，影响光照，从而造成玻璃化现象加重。
19．在组培中，叶片较易脱落，是什么原因引起的呢？
答：叶片脱落是对逆境的一种表现，温度过高、透气不良、培养物过于密集、久不转移、有害气体积累（乙烯、氨气、甲醛）等会引起植物材料的落叶或黄化。 
20．空白培养是什么意思？
答：空白培养在高效外植体系的建立方面是很有用的步骤，空白培养就是不加任何激素的培养过程。对于外植体迅速适应瓶内环境和有效外植体群体的建立是很有用的。
21．如果芽体只是长高，不膨大也不分化，有的静止不动，请问这会是什么原因引起的呢? 
答：成活外植体如何成功启动是组培过程中至关重要的环节之一。由于大田植物材料其激素水平和细胞活性差距较大，如何迅速将外植体对培养基条件做出反应也有很多方法，首先芽体萌发时应用赤霉素，黑暗培养，高低激素配合使用等都会起到很好的效果。
22．用幼芽启动用于分化芽的愈伤，NAA与6-BA的比例有一般规律吗？还有用2，4-D启动的愈伤再转到只含NAA和6-BA的培养基中，愈伤变为绿色，有分化的可能吗？ 
答：离体的愈伤组织是一种正在增生的非组织化的细胞群，可以从几乎任何类型的植株获得。由外植体形成愈伤组织很少是自发的，它代表创伤反应的扩展，一般要求在培养基中有生长素，常常还要求有细胞分裂素同时存在。最有效地产生愈伤组织的激素浓度随所用的植物及器官而异，但其比外植体直接诱导苗所需的浓度要高。大多数植物中愈伤组织可从外植体上分离开，并可进行继代培养和连续繁殖，所使用的培养基中所含的激素水平，与用于诱导愈伤组织时相同。如果降低激素水平，或适当调节生长素对细胞分裂素的比例，某些愈伤组织将再生出苗或胚。
23．洋葱也能加在培养基中？能说说它的机理吗？
答：培养基中添加有机附加物，如马铃薯、香蕉、椰汁等，主要是由于他们含有丰富的糖、蛋白质、各种无机盐、维生素以及各种活性物质。洋葱也不例外，除了含有丰富的营养物质之外，洋葱还含有丰富的硫化合物，是强有力的抗菌成分，能杀死多种细菌。
24．在壮苗生根培养基中培养，会有黄叶出现，叶子都枯了。是什么原因引起的? 
答：组培苗的黄化是由培养基成分、环境、激素、碳水化合物等各种因素引起的，但这样的解释是比较抽象的。我觉得在壮苗生根阶段，由于培养基的变化，特别是激素的改变导致培养基高压灭菌后PH变化与分化阶段是有较大差别的，加之苗子与培养基接触面积的变小，营养供应滞后。所以当根长出来以后，会有不同程度的改变。如果解决的话，还应该确定一下生根培养基高压灭菌后的pH变化，进行适当调整，同时在分化时进行适当壮苗调整也是比较好的方法。
25．请问：（1）接种前，接种工具要浸泡在酒精中，所使用的酒精浓度是75%还是95%？（2）我用新铁炮百合鳞片作外植体，对鳞片切割有没有什么方法可以减少污染，书上讲根据极性方向接种到培养基上，怎么判断极性呢？（3）使用玻璃瓶和不锈钢的盖子作为培养容器，透气性是不是不好，会影响培养效果吗？ 
答：接种工具接种灼烧前浸泡酒精的浓度，可以是75%也可以是95%的。至于极
性指的就是植物材料有趋向发育的特征。比如是茎繁，靠近茎顶端发出芽子，
远离茎顶端会长出根。是根繁的话，新芽发生于近心端，新根发生于远心端。因此在接种时，尽量不要使材料倒置，尽量保持植物的极性方位，不能将茎端插入培养基内。培养容器的透气性是决定瓶内湿度和气体状况的主要因素，因此如果过于密封，使瓶内外得不到气体交换，就会不同程度的受到影响。建议使用透气性好的培养容器。
26．生化培养箱可以进行植物组织培养吗？它与光照培养箱有什么不同？
答：光照培养箱主要是模拟植物的光照条件，更适合植物的培养、种子发芽等的实验，而生化培养箱更偏重于温度、湿度的控制，微生物实验等比较合适。
27．高压灭菌后培养基的pH会变大还是变小？MS和1/2MS哪种培养基pH变化更大？
答：培养基灭菌后pH会降低0.2左右，其主要原因就是有机物的分解，特别是维生素、氨基酸和糖，因此MS会比1/2MS培养基pH变化更大。 
28．内生菌造成的污染在外观上怎么辨别？ 
答：内生菌是指在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官的细胞间隙或细胞内的细菌，可通过组织学方法或从严格表面消毒的植物组织中分离或从植物组织内直接产生扩增出微生物DNA的方法来证明其内生。在植物组织培养中，由于材料内部的内生细菌不能被一般的表面消毒方法所清除，随着材料带入培养过程，从而引起的污染称为内生细菌污染。从污染状态来看，是发生于植物材料周围，一般会由培养基内向外延展，并且发生的时间也会比接触性污染要长，接触性的细菌一般在2－4天表现，内生菌则会超过4天，并且菌的种类也相对单一。
29．水解酪蛋白有酸水解，有酶水解，在使用过程中有没有区别，他们的在培养基中的作用是一样的吗？
答：水解酪蛋白（CH）和水解乳蛋白（LH）是多种氨基酸的混合物，对胚状体、不定芽的分化有良好的促进作用，通常用量在500mg/L，特别是当有高水平IAA存在时更是如此。对于酪蛋白不管是酸解还是酶解，作用都是一样的，但考虑到组培苗的异养功能，酸解应该更有利于发挥其作用。 
30．有些树种受伤后会分泌出一些白色的浆液，比如梓叶槭，不管是茎段还是叶片，只要有伤口的地方都会有浆液，而这会加重外植体的褐化，请问应该怎么处理呢？ 
答：这是植物的伤流现象。由于伤流液中含有酚类物质，因此在培养中极易引起褐变。许多研究表明，选择适当的外植体和培养条件是克服褐变的最主要手段。通常外植体应有较强的分生能力，在最适宜的细胞脱分化和再分化培养条件下，使外植体处于旺盛的生长状态，便可大大减轻褐变。适宜的温度和在全黑暗条件下进行培养也可显著减小外植体的褐变。液体培养和连续转接也是很好的措施。另外，加入一些氧化剂或用抗氧化剂进行材料（外植体）的预处理或预培养，可大大减轻醌类物质的毒害。这些抗氧化剂包括：VC、柠檬酸、硫代硫酸钠等。此外，0.1％-0.5％活性炭对吸附酚类氧化物的效果也很明显。