返回首页
|
招贤纳士
|
联系我们
全国服务热线:
400-007-0007 010-62164211
工作时间:周一至周五 8:30-17:30
网站首页
走进易生
公司简介
公司资质
营销网络
合作交流
联系我们
易生新闻
企业动态
产品动态
行业动态
会展信息
公告栏
经典案例
组培知识
业务纵览
组培室规划建设
组培技术咨询培训
环境模拟空间建设
智能自控补光建设
生物实验室建设
研发中心
组培技术研发中心
深圳研发中心
产品中心
植物种子、种苗
植物组培实验室
食品检测系列仪器
企业文化
经营理念
企业宗旨
愿景与使命
企业形象
企业社会责任
社会责任理念
农业发展
员工发展
社会公益
客户指南
服务流程
订购合同
产品价格
付款方式
公司承诺
退换货流程
易生新闻
企业动态
产品动态
行业动态
会展信息
公告栏
经典案例
组培知识
企业关联网站
起航生物
组培网
组培知识
当前位置:
主页
>
易生新闻
>
组培知识
>
杀菌剂对枸杞组织培养中真菌污染的控制作用
枸杞(
Lycium barbarumL.
),茄科,属落叶灌木,是重要的“药食同源”的功能型特产资源。枸杞耐盐碱、耐干旱、耐寒,是我国北方地区防风固沙、绿化与美化环境的优良树种,具有良好的发展前景。因此,研究枸杞的组织培养快繁技术具有现实意义。枸杞的组织培养过程中,在培养基中添加杀菌剂已成为防治污染的一种重要方法,并已得到广泛运用。但目前,该方面研究主要集中在防治细菌污染,如罗青等的研究,对真菌污染方面的研究较少。笔者通过在培养基中添加不同浓度的各种农用杀菌剂,探索出了一条控制枸杞组培快繁中真菌污染的有效途径,从而选用被污染枸杞组培苗的茎尖、基部腋芽和侧芽等为材料,培养获得再生植株,为今后枸杞的组培快繁技术提供一定科学依据与参考。
1 真菌污染产生的原因
1.1 培养材料污染 外植体材料带菌多,如果表面消毒不彻底,即杀菌剂使用不当或处理时间不适,未将病菌全部杀死,从而导致接种后病菌在培养基中扩大繁衍。
1.2 操作器具带菌 操作器械、器皿(镊子、剪子、刀片、三角瓶、培养皿、超净工作台、酒精灯)等未经严格的高温灭菌,则会产生污染。另外,器械在灭菌后的取放过程中不慎带菌也会造成污染。
1.3 培养基污染 经过灭菌的空白培养基有时也会出现污染。若菌落只存在于培养基表面,则有可能是封口不严或放置培养基环境中的病菌孢子过多所致;若有白色云雾状物质,且出现在培养基内部,则表明灭菌不彻底。另外,母液放置过久,也会造成培养基的污染。
1.4 培养物生长环境不洁 培养物的生长环境(组培室、接种室)不卫生,如门窗封闭不严,则蚊蝇、飞蛾、虫子易进出,有利于杂菌传播。同时,室内尘埃多,经常不清扫消毒,会使菌落增多造成污染。
1.5 接种人员带菌 接种人员对自身消毒不严或无菌操作技术不熟练,容易造成组培苗的污染。
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 培养物材料 枸杞继代培养中受真菌污染严重的部位,包括枸杞组培苗的茎尖、基部腋芽和侧芽等。
2.1.2 试剂 杀菌剂为50%多菌灵可湿性粉剂、75%代森锰锌可湿性粉剂、25%甲霜灵可湿性粉剂作为杀菌剂;分化培养基为MS+6-BA0.01 mg/L+NAA0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4 g/L,pH值5.8,无菌水(将蒸馏水装入三角瓶,封口,在121℃的高压灭菌锅中保持30 min,冷却后备用)。
2.1.3 仪器。高压灭菌锅、超净工作台、分析天平。
2.2 方法在枸杞的分化培养基中,分别加入3种杀菌剂:50%多菌灵可湿性粉剂、75%代森锰锌可湿性粉剂、25%甲霜灵可湿性粉剂各1.5 g/L,对照(CK)则不加任何杀菌剂。按80 ml/瓶分装,经常规高温高压灭菌备用。再将受真菌污染的培养材料用无菌水震荡清洗3次,每次5min左右,再转接入已制备好的培养基中,每处理转接20瓶,每瓶1个污染材
料。在光照12 h/d、光强2000lx和温度23℃的条件下,培养并观察培养材料的污染及生长情况。
3 结果与分析
在对枸杞组织培养过程中,75%代森锰锌可湿性粉剂的污染率较低,仅10%,即抑菌率较高,达90%,对真菌污染具有显著的防治效果,枸杞的生长情况良好,这表明75%代森锰锌对培养材料的生长未构成影响,反而对其具有一定的促进作用。其次,抑菌效果较好的杀菌剂为50%多菌灵可湿性粉剂,其有较明显的抑菌效果,污染率为15%,即抑菌率为85%,成活的枸杞的生长情况较好。对照组(CK)未添加任何杀菌剂,该组的污染率达100%,培养材料全部死亡。因此,在各杀菌剂对枸杞组织培养中真菌污染的控制作用研究中,75%代森锰锌可湿性粉剂的杀菌效果最好,其次为50%多菌灵可湿性粉剂。
4 结论与讨论
(1)以往在枸杞继代培养中一旦出现真菌污染,就将材料丢弃,但对于较珍贵的材料会造成不可避免的浪费,笔者通过在培养基中加入3种常用的杀菌剂,对其抑菌效果进行比较,找到了一种在枸杞继代培养中既能有效防止真菌污染,又能在一定程度上促进组培苗生长发育的杀菌剂――75%代森锰锌可湿性粉剂,不仅成本低,而且污染远远小于升汞,对枸杞组培苗的生长无不良影响,对枸杞组织培养中防止真菌污染具有十分重要的意义。
(2)在枸杞组织培养过程中,继代培养时的微生物污染,往往是真菌和细菌的混合污染或内源菌和外源菌的混合污染,情况较为复杂。因此,在培养基中添加杀菌剂抑制真菌外的同时,还应添加抗生素抑制细菌。