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组培知识

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一品红的组织培养及快速繁殖研究

1 材料与方法
1.1 材料  以生长健壮、洁净无病的盆栽植株为供试材料,从植株上切取当年生幼嫩枝梢作为外植体。
1.2 材料表面灭菌及接种  外植体先用适当浓度的洗衣粉液清洗5~8分钟,再用流水冲洗 30 分钟,放在超净工作台上进行表面灭菌接种。灭菌时先用500倍多菌灵沉清液处理8~10 分钟,然后置于0.1%氯化汞溶液中处理8~12分钟,最后用无菌水冲洗4~8次待用。消毒后的材料,在无菌条件下用利刀将嫩梢切成长约0.5~1cm的茎段接种到诱导培养基上。从植株上切取当年生幼嫩枝梢作为外植体。
1.3 培养基
诱导培养基: ①MS+6-BA 0.1mg/L ( 单位下同) + NAA 0.1+2,4- D 1.5;①MS+6-BA 0.1+NAA 0.1+2,4-D 2.0;③MS+6-BA 0.1+NAA 0.1+2,4-D 2.5。
增殖培养基: ④MS+6-BA 2+NAA 0.1; ⑤MS+6-BA 0.5+NAA 0.1; ⑥MS+6-BA 0.5+NAA 0.1+I
BA 0.005;⑦MS+6-BA 0.5+IBA 0.1。
生根与生长培养基:⑧1/2 MS+IBA 1.0;⑨1/2 MS+IAA 1.0。
以上培养基食用蔗糖①、②、③、④、⑤、⑥、⑦为3.5%,⑧、⑨为2.5%,pH值均为5.6~5.8, 琼脂均为0.7%~0.8%,所有培养基分装后于121~125℃下高温灭菌18~20分钟,冷凝后备用。
1.4 培养条件
培养温度保持23~27℃,光照强度为1500~2000Lx,光周期性为12小时/天光照+12小时/天黑暗。
2 生长与分化情况
2.1 不定芽的诱导与增殖
外植体在诱导培养基上,25~35天开始产生愈伤组织,50~65天后开始产生丛生芽苗。其中尤以②培养基诱导效果较好,增殖培养以④、⑥培养基结合培养效果较为理想,可培养出健壮优质的再生植株,增殖时间一般以20~30天为1个周期。
2.2 生根培养
将已分化出来的2~3cm的芽苗转接至⑧、⑨培养基上,约经10~12天开始生根,15天后长出3~6条1~3cm的白色根,其中以⑧培养基生根较为理想。与此同时,我们还做了不同浓度的活性炭试验,发现加了活性炭的芽苗生长效果较未加要健壮、青绿,生根效果也更好,其中尤以活性炭浓度0.65~1.0g/L的芽苗生长及生根效果较为理想。
2.3 移植前培养
将完整试管苗在温室内炼苗3~7天,然后逐渐开瓶炼苗1~2天,即可将苗的根部培养基充分
洗净后,用800~1000倍的多菌灵溶液浸泡1~2分钟,移栽至灭菌的蛭石基质中,栽植后浇透水,湿度保持在80%~95%左右,温度20~28℃,以后逐渐减少遮阴和喷雾次数,同时注意喷药防治病菌感染并切实加强肥水管理。培养10~15天长出新根后可移至正常环境条件下,以适应自然光照和温度、湿度条件,逐渐成为商品苗。
3 讨论
在一品红增殖培养过程中,我们观察到其增殖速率与6-BA浓度成正相关,但芽苗生长速度
与6-BA浓度成负相关,因此,苗的增殖速率很高,苗丛生矮化,不宜直接生根,应当经过⑤、⑥、⑦培养基的处理,使芽苗长高长壮后再进行生根较为理想。同时发现,在继代培养过程中加入少量的IBA有利芽苗生长,但浓度不宜过高。并且在增殖培养过程中,常常会产生类生菌,为此,我们做了不同的处理试验,最后发现宜先用1%的次氯酸钠溶液处理10分钟,然后用无菌水清洗1次并浸泡6~10分钟,再用0.1%氯化汞溶液处理3分钟后,用无菌水清洗1次并浸泡3~5分钟,最后用0.1%氯化汞溶液处理5分钟,并用无菌水冲4~6次,若连续用0.1%氯化汞溶液处理8分钟,则会将芽苗杀死。

原文作者:江西省吉安市农业局戴祥生,由易生组培整理。如果您有好的文章,可以发送邮件至:tech@360bio.net,与组培从业人员进行分享。