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卧牛的组织培养与快速繁殖
1
植物名称
卧牛(
Gasteria armstrongii
)
2
材料类别
侧芽,供试植株来源于日本专门家联盟。
3
培养条件
(1)启动培养基MS+6-BA 2.0mg·L-1(单位下同)+NAA 0.2;(2)分化培养基MS+6-BA2.0+KT 1.0+PVP 2g·L-1;(3)增殖培养基MS+6-BA 1.0+KT 0.5+PVP 1g·L-1;(4)复壮与生根培养基1/2MS+NAA 0.2。以上培养基均加入3%蔗糖、0.7%琼脂,pH 6.0,培养温度为(25 ℃),光照时间8 h·d-1光照度为2000lx。
4
生长与分化情况
4.1
无菌材料的获得
除去侧芽外周叶片保留生长点附近2~3片嫩叶,经流水冲洗10min,1% 新洁尔灭浸洗5min ,无菌水冲洗3次,0.1%HgCl2溶液浸8min,无菌水再冲洗6次。将消毒的材料置于无菌滤纸上,吸取残留液体,切去叶片尖端,将侧芽纵切分开,即成外植体。
4.2
启动培养
将卧牛的外植体接入启动培养基(1),20d后依次从生长点,茎截面及叶截面等处陆续产生黄绿色愈伤组织,并伴有褐变现象。此时,需将材料转入新鲜培养基中,否则愈伤组织会出现衰退。转移后的愈伤组织生长迅速,再经过30d左右,生长点愈伤组织最先形成绿色球状小体(GCB),大约40~60d后叶截面和茎截面愈伤组织才开始形成GCB。
4.3
分化培养
切取绿色的GCB团块转入分化培养基(2)中,约30d后GCB开始向芽分,化从表面可以很直观地看到每个球状体都可以形成一个芽点,且绿色加深,继续培养20d,愈伤组织团块顶部的GCB 首先形成芽,继而整个团块形成丛生芽底部GCB分化较差,仍然保持GCB 状态,分化形成的芽可以在5d内伸展出第一对叶片。
4.4
芽的增殖
将上述丛生芽分割成4~5丛,每丛含5~8个芽,弃去底部未分化组织后转入培养基(3)。 经过7d左右的静止期,增殖开始并加速,大约30d后各瓶都可形成整瓶丛生芽。继代3代之后或者继代间隔过长,极易发生褐变,PVP的使用可适当减缓褐变加重,但不能避免,故转瓶周期应控制在25d以内。同时,切去基部的愈伤组织也可减轻褐变,增殖倍数为4~6 倍。
4.5
壮苗与生根
将培养基(3)中的丛生芽分割为单个芽,转入培养基(4)中,每瓶6~8 个,加强光照至3000lx 或者采用散射阳光代替日光灯,大约10d, 即可见50% 左右的芽开始生根;20d后80%的芽生根,根短粗,2~3条,30d后,芽的叶片增厚,第3~4片叶生出,根系变化不明显,有轻微褐变现象。
4.6
移栽
采用蛭石珍珠岩泥炭(2: 1: 1)的混合基质,经高压灭菌后装入苗钵,距顶端大约5cm, 打开瓶口炼苗2~3d,取出植株,仅保留1~2 条粗根,去掉其余根系,遮荫风干2~3d, 扦插于基质中,用青霉素(80万U·L-1)、链霉素(0.5g·L-1)、甲硝唑(0.1 g·L-1)、制霉菌素(100 U·L-1)、配成的“四抗”溶液浇灌,逐渐见光,瓶苗成活率可达90%以上。
5
意义与进展
卧牛是百合科脂麻掌属的多肉植物,原产于非洲开普省,此种植物是叶多肉的多肉植物之一和百合科多肉植物的代表种之一,各国植物园和园艺单位对其作了广泛收集和研究。卧牛主要通过播种、侧芽或叶插繁殖,繁殖系数很低,生长十分缓慢,不利于园艺品种的筛选和保存。组织培养技术可能是解决此问题的有效手段之一。
原文作者:天津农业科学院生物技术中心 夏时运,由易生组培整理。如果您有好的文章,可以发送邮件至:tech@360bio.net,与组培从业人员进行分享。