瓷玫瑰是姜科艳山姜属多年生草本植物,植株丛生,株高3-7米,叶互生,二行排列,长圆状披针形,叶色深绿,光滑,长50厘米左右,宽15厘米左右,头状花序由地下茎抽出,玫瑰花型,花瓣革质,表面光滑,亮丽如瓷,有50-100瓣不等。花期夏季。
外植体的预处理 用自来水洗净泥土,用沾有洗洁精的软毛刷轻轻刷洗,自来水冲洗30 min,在无菌条件下用75%酒精进行表面消毒30s,无菌水冲洗1次,0.1%升汞溶液中处理约12min(滴入2滴吐温80),同时不断地摇动。使材料始终浸泡在升汞溶液中,无菌水洗涤5~6次,用无菌滤纸吸干表面水分。再从外到里层剥去叶鞘切去,切去多余的球茎组织,直至lcm 左右,以锋利的手术刀将材料平均纵剖成两半。接入已准备好的培养基中。
外植体的初始培养 将消毒好的外植体接种于MS附加6-BA1.0mg/L、2.0 mg/L、3.0mg/L、4.0mg/L、5.0mg/L,NAA0.1mg/L、O.3mg/L、0.5mg/L的固体培养基上。在26±2℃下,1000~1500Lx光照培养10~12h/d、pH 值5.8~6.0。
丛芽的形成和继代增殖 将初始培养获得的无菌芽作适当的纵向切割。培养于MS附加6-BA3.0mg/L、NAA0.5mg/L的培养基上。
催根培养及试管苗移栽(诱导生根) 将4~5cm高的小苗接种于1/2MS附加KT0.5mg/L+IBA1.0g/L+Ac3.0mg/L:1/2MS+KT0.5mg/L+IBA0.5mg/L +NAA0.5mg/L +Ac3mg/L;1/2MS:1/2M S+NAA1.0mg/L+IBA0.5mg/L+Ac3g/L的催化培养基上。在28℃下,1 500Lx光照培养12h/d。
试管苗的移栽 将瓶苗摆放在自然温度的室内5~7d,然后打开瓶盖,再放置2d,取出苗,用流水洗净其上的培养基,并用1000倍液的多菌灵浸泡lOmin。然后放置在室内自然风干1d,移栽于以下基质中:① 河砂与表土的质量比=2:1;②河砂与椰糠的质量比=2:1;③ 河砂、椰糠、表土的质量比=2:1:1。保持适当的温度、湿度和光照条件。以比较不同的移栽基质成活率的影响。
结果与分析
无菌株系的获得
嫩芽接种于第一培养基1个月内。每周对外植体侧芽更换新鲜培养基能有效地避免外植体的褐变现象。同时在培养基中加入维生素c或活性炭均能减少或降低外植体的褐化,提高外植体的萌发率,从而获得更多的无菌株系。其中以加入维生素C150mg/L的效果最好,发芽率达到100%。因此,确定MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+Vc150mg/L为外植体接种的起始培养基。
丛芽继代培养及正常化生长
在获得的无菌株系基础上,把在起始培养过程中所形成的芽切割后分别接种于MS附加6-BA1-5mg/L+NAA0.1mg/L。于26±2℃、1500-2000Lx、12h/d的光照条件下培养以诱导丛生芽的形成。形成的丛生芽,再分割成带2~3个芽的芽丛,接种进行继代增殖。转接后,在各种增殖培养基上均能形成丛生芽。但不同的培养基成分形成丛生芽的质量和数量均有较大的差别。可以看出,随着6-BA浓度的增加,其增殖率也在增加。6-BA与NAA配合使用比6-BA单独使用效果好。当6-BA浓度为3.0mg/L、NAA为0.3mg/L时。20d后其增殖系数达到4~8。当6-BA浓度过高(5.0mg/L),增殖系数高,但是芽细弱;NAA大于0.5mg/L时,还会有部分丛生芽长出根,不利于增殖。
生根培养
将长至4--5cm以上的无根增殖苗由丛生芽上单芽切下,转到生根培养基上。实验结果表明,在各种生根培养基上,均能长出根。可以看出,IBA与NAA配合使用,有利于生根。当NAA、IBA的浓度分别为2.0mg/L和0.5mg/L时,诱导生根率达到100%。每株有4--6条健壮的根,且所需时间也较短。2周后,即可长成完整的根系。本实验所确定的最佳生根培养基为1/2MS+NAA2.0mg/L+IBA0.5mg/L。
植株的移栽
试验表明,以河砂、椰糠、表土的质量比=2:1:1为最好。当温度保持在22—27℃、湿度在80%-90%条件下,根系完整、枝干健壮的组培苗移栽后,成活率可达90%以上,移栽后小苗生长健壮。