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组培知识

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组培过程中几种常用灭菌剂的灭菌原理

氯化汞
  氯化汞也称升汞,是一种剧毒的重金属盐杀菌剂,其杀菌的原理是Hg2+可与带负电荷的蛋白质结合,使细菌蛋白变性,酶失活。氯化汞使用浓度为0.1%~0.2%,浸泡8~15分钟,就可以有效地杀死附着在外植体表面的细菌及真菌芽孢,灭菌效果极好。
    但用氯化汞灭过菌的外植体材料要用无菌水反复多次洗涤(一般不少于5次),才可将残留的药剂除净。使用氯化汞会给环境造成污染,一般情况下,应尽量用其它消毒剂灭菌,而以少用或不用氯化汞为宜。

次氯酸钠
  市售次氯酸钠又称为“安替福民”,活性氧含量是0.8%,使用时稀释3~5倍,浸泡外植体5~30分钟后,再用无菌水洗涤4~5次。它分解出具有杀菌作用的氯气,灭菌后易于除去,不留残余,杀菌力强,对植物材料无害,是植物组织培养常用的杀菌剂之一。

漂白粉
  漂白粉为白色的粉末,一般含10%~20%(质量/体积)的次氯酸钙[ca(clo)2],使用时用饱和溶液,杀菌的原理在于它分解出具有杀菌作用的氯气。氯与蛋白质中的氨结合,使菌体蛋白质氧化,代谢功能发生障碍。注意漂白粉腐蚀金属、棉织品,刺激皮肤,易吸潮散失有效氯而失效,平时要密封储藏,最好现配现用,不要储藏太久。

酒精
  酒精(乙醇)具有较强的穿透力和杀菌力,它使细菌蛋白质变性。使用的浓度一般为70%~75%。处理时间15~30秒,不宜太长,因为细胞容易收缩脱水。它具有浸润和灭菌的双重作用,使用于表面消毒,但不能达到彻底的灭菌,必须结合其它药剂灭菌。
   为了提高乙醇的杀菌效果,可在乙醇溶液中加入0.1%的酸或碱,以改变细胞表面带电荷的性质而增加膜透性,提高乙醇的灭菌效果。

高锰酸钾
  高锰酸钾的灭菌原理在于它能使细菌酶蛋白中的巯基氧化成二硫基而失去酶活性。浓度稀时起氧化作用杀死细菌,日常生活中通常用作皮肤、果蔬的表面消毒剂,在一盆清水中加入几粒高锰酸钾就可起到杀菌的作用。