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组培知识

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种质资源的保存方法

  常规的种质资源库通常以种子形式保存,或采用资源圃种植保存方法,尤其是种植保存需占用大面积的土地,并需花费巨大的人力、财力进行长期管理,然而保存数量仍然有限,如果遭到病虫害等自然灾害更有全部毁灭的危险。近年来,随着植物组织培养工作的蓬勃发展,人们对植物组织培养物的低温保存和超低温保存及其种质库的建立也日趋重视,并已取得很大的进展。用植物组织培养法,保存种质资源的方法主要有以下几种:

低温保存

  低温保存是让培养物在培养基上生长一段时间后移入一定低温条件下(1℃~9℃)保存,使其处于缓慢的生长状态,使用此法可使培养物保存几个月甚至一年以上。为了使培养物能长期处在缓慢的生长状态,必要时采用继代培养的方法,把培养物定期转移到新鲜的培养基上再培养。低温保存的方法,简便易行,也不需要很大的投资,只需普通的可控温的光照培养箱或配备空调装置的小培养室即可,而且经过保存后,植物材料复苏快、生活力高,对一般组培单位保存原种材料极为实用。缺点是仍需要定期转移进行继代培养才能保存更长的时间。
常温下抑制生长保存

  常温下抑制生长保存是指在常温下,在保存培养基中加入多效唑、B9、CCC等生长延缓剂或抑制剂,使所保存材料的生长速度得到抑制,从而延长保存时间。这种方法的优点是简单,易操作,又经济,还可使试管苗叶色浓绿,矮壮,易生根。缺点也是需要定期转移进行继代培养才能保存更长的时间。另外,长期的多次继代培养仍有可能诱发变异,产生遗传不稳定性,并使材料的再分化能力逐渐下降。

超低温保存

  超低温保存也叫冷冻保存,主要是指在液氮(-196℃)的超低温下使细胞代谢和生长处于基本停止的状态,但细胞、组织、和器官在超低温保存的情况下不会引起遗传性状的改变,却仍能保存细胞的活力和形态发生能力。在需要时,提供适宜的条件,可迅速恢复繁殖状态,再生出新的植株,并保持原来的遗传特性。利用超低温保存除了可以对珍稀植物进行种质保存,还可保存花粉,延长花粉寿命,解决不同开花期和异地植物杂交上的困难。超低温保存法的缺点是在降温冰冻过程中,如果植物细胞内的水形成冰晶结冰,就会造成细胞结构不可逆的破坏,导致死亡。因此,在超低温保存材料的过程中必须严格注意处理程序。