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长苏石斛的组织培养

  长苏石斛(Dendrobium brymerianum f.)为我国原生种,兰科石斛属多年生草本植物。长苏石斛的唇瓣有很长的流苏,花金黄色,观赏价值极高,多生于海拔1100-1900m的林中树干或岩石上,我国云南是其主要分布中心。组织培养可快速获得大量种苗,成苗快而整齐,具有一定的潜在应用前景。建立长苏石斛离体培养和再生体系将为长苏石斛进一步的生理、遗传育种等方面的研究奠定基础。
材料类别:长苏石斛茎段。
培养条件:
  芽萌发培养基(1)MS+6-BA1.Omg/L+NAAO.1mg/L;(2)MS+6-BA2.Omg/L+NAA O.lmg/L。
  继代培养基(1)MS+6-BA0.5mg/L(2)MS+6-BA0.5mg/L+NAA O.lmg/L;(3)MS+6-BA1.Omg/L+NAA O.lmg/L;(4) MS+6-BA1.Omg/L+NAA0.5mg/L;(5)MS+6-BA0.5mg/L+NAA O.lmg/L+椰子水10%。
  生根培养基1/2MS+IBA0.5mg/L+活性炭0.5mg/Lo
  上述培养基中均添加20mg/L蔗糖和7.Omg/L琼脂,pH值为5.6一5.8。培养温度为(25土2) ℃,光照强度为200001ux,光照时间为 12小时/天。
生长与分化
  无菌材料的获得选择生长健壮的植株,剪取当年生上部6-8cm长的幼嫩茎段,放入洗洁精溶液中漂洗5-8分钟,然后在自来水下冲洗30分钟,去除叶片,剪成2-3段,放入无菌瓶中,在超净工作台上用70%酒精浸泡30秒,0.1%升汞灭菌8分钟,无菌水冲洗6-8次,然后用无菌吸水纸吸干,切取lcm左右带节的茎段。芽的诱导将茎段接种到芽萌发培养基(1)和(2)上,10天后培养基(2)上的茎段侧芽开始萌动,15天后培养基(1)上的侧芽也开始萌发,但诱导率明显低于培养基(2)。培养基(2)的诱导率达70%,培养基(1)的诱导率仅为56%。
芽的增殖与继代
  当侧芽长至1-2 cm,叶片2-3枚时,将侧芽从茎段上切下转接人继代培养基(1)-(5)中进行增殖,以50天为一个继代增殖周期,计算出每种培养基的扩繁系数。其中长苏石斛在继代培养基(5)上的扩繁系数最高,达5.7,在继代培养基(1)上的扩繁系数最低,仅3.2。添加了椰子水的培养基上的丛生芽生长较健壮,适合生根移栽。
生根及移栽
  将丛生芽切成单个芽体,选取生长健壮的个体转接入生根培养基上进行不定根的诱导。培养约15天后,从试管苗基部长出2-3条白色的根,形成完整植株,生根率达90%。待根长2-3cm,根量增多,根系粗壮时,置于温室中,3-5天后打开瓶盖,每天用喷壶喷水,防止幼苗失水。2-3天后从培养瓶中取出幼苗,洗净根部的培养基,移栽入湿润的水苔中,喷水保湿,以后每隔3-5天用喷壶喷施1次MS营养液,直至幼苗长至5cm左右且生长健壮。保持环境温度20℃-25℃,成活率可达80%。