植物名称：长瓣兜兰(Paphiopedilum dianthumTang et Wang)。
材料类别：种子。
培养条件
    种子萌发培养基: (1)1/2MS+马铃薯汁100 mg•L-1(单位下同)；(2)MS+马铃薯汁100；(3)1/2MS+100mL•L-1椰乳；(4)MS+100 mL•L-1椰乳。
    原球茎继代增殖培养基: (1)1/2MS+6-BA0.2+NAA0.5+100 mL•L-1椰乳；(2)1/2MS+6-BA0.2+NAA1.0+100 mL•L-1椰乳。壮苗及生根培养基:(3)1/2MS+吲哚丁酸(IBA)0.2+2 g•L-1活性炭；(4)1/2MS+IBA0.4+2g•L-1活性炭。
    以上培养基均加2.0% 蔗糖和0.6%琼脂,pH 5.2~5.4。培养温度为(25±2) ℃, 光照强度为30~40μmol•m-2•s-1,光照时间为12 h•d-1。
生长与分化情况
    材料的无菌处理：人工授粉420d的荚果经自来水洗净后,置于10%次氯酸钠溶液中消毒20min,用70%的酒精表面消毒30s,再以0.1%的升汞溶液消毒10min,最后用无菌水冲洗5次。将洗净的长瓣兜兰成熟荚果置于灭菌滤纸上吸干水分,用解剖刀切开荚果,将种子接种到培养基上。
    种子萌发：发育420d的种子分别接种到萌发培养基(1)~(4)上,置于光照培养箱中培养12周后，可见白色原球体出现,继续培养5周后原球茎转绿,有叶原基出现,5周后原球茎上长芽。种子接入以上培养基均能萌发,其中培养基(3)、(4)的萌发率和萌发速度比培养基(1)、(2)都好,种子萌发率达60%以上,说明加入椰乳有利于长瓣兜兰种子萌发。培养基(3)较培养基(4)的萌发速度快,可提前20d左右,培养基(3)上的种子出芽后生长较快,10周左右就能长满瓶,表明1/2MS培养基较MS培养基更有利于长瓣兜兰种子萌发生长。培养基(1)的种子萌发率在40%左右,培养基(2)的种子萌发率在30% 左右,可见种子在以上培养基上均有萌发,只是萌发率各有不同。
       原球茎继代增殖：将初代培养的原球茎和芽分别转接至培养基(5)和(6)上继代增殖培养,培养基(5)原球茎少部分分化成植株,增殖速度慢；培养基(6)原球茎大多数分化为植株,增殖速度快,以培养基(6)的增殖效果好,80~90d能继代增殖1次。由此可见,NAA和6-BA组合是原球茎继代增殖的主要因素,并以6-BA与NAA浓度比为5:1的效果最佳。
    生根培养：将较大的无根苗转入生根培养基(7)和(8)上培养,生根率达90%以上,植株生长旺盛,8周后长出1~2 条肉质根,生长为高 3~5 cm 的小苗,培养基(7)比培养基(8)根系发达,说明低浓度的IBA有利于根的产生,高浓度IBA对根的萌发有抑制作用。
    移栽：将培养瓶置于温室中炼苗2周后,从培养瓶中取出生根苗,洗净附着的培养基,将水苔用1000倍多菌灵溶液浸泡1h,挤干水分,包裹出瓶苗根部,种植于穴盘中。管理中保持适度温湿度,置于阴凉通风处栽培,期间不要浇水,有利于新根生长和防止病害发生,6周后移入温室中栽培,进行正常水、肥、药管理,成活率可达90% 以上。
意义与进展
    长瓣兜兰属兰科兜兰属植物,产于云南南部、贵州和广西西南部,生长于海拔1000~2300m的透光林下或岩石上。地生种类,叶 3~5枚,质地厚,长30cm,宽3.5~5cm,花葶高30~80cm,绿色,花通常2~4朵, 花期 7~9月。兜兰属最为重要的特征是它的花,具深囊状的唇瓣,如淑女穿着的拖鞋。我国是世界兜兰属植物的重要分布地和许多新种模式产地,全部种类都有观赏价值,社会需求量大,由于长期无节制的乱采滥挖，野生资源已枯竭,现在不仅已列入国家的珍稀濒危植物而加以保护,而且还收载于国际贸易公约(CITES)附录二中,受到国际保护。长瓣兜兰常用种子或分株法繁殖,其种子在自然条件下极难萌发,且繁殖率低。采用组织培养的技术有利于解决其繁殖困难和种苗的不足,以及短期内可以提供大量种苗问题,同属植物的组培快繁已有过报道,但是以长瓣兜兰种子进行的组织培养和快速繁殖的报道尚未见。