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白芨组织培养的途径
1、种子萌发途径
白芨种子虽然没有胚乳,但郭顺星和徐锦堂的研究表明,白芨胚的薄壁细胞贮存大量的蛋白质、油脂和碳水化合物,可作为种子萌发的营养成分,因此白芨种子在保湿的情况下可以萌发,是兰科植物中种子易萌发的类型。故此,目前大部分白芨组织培养研究的外植体都选用种子,采用Bemard创立的非共生萌发法,将种子播撒在培养基上进行无菌萌发。
种子萌发后所采用的组培程序则各有不同。有的作者采用“原球茎→诱导原球茎增殖→诱导芽的分化→诱导生根”的组织培养程序,增殖主要利用诱导原球茎增殖完成,继代培养也采用原球茎;有的作者采用“原球茎→诱导丛生芽增殖 →诱导芽的分化及生根” 的组织培养程序,继代培养使用丛生芽;有的则直接采用“原球茎→诱导芽的分化→诱导根”的组织培养程序;还有的作者采用原球茎直接“生长分化→诱导生根”的程序。这些组培方法都能取得扩繁的效果,但扩繁效果有一定差别。
白芨的蒴果中有大量的种子,并且蒴果的消毒较方便,污染率低。另一方面用种子作为外植体操作较容易,并且组培过程中萌发率高,培养的幼苗生长较为迅速,因此,种子作为外植体应用比较广泛,大部分的组培研究都选用种子。
2、白芨块茎、侧芽、茎尖或幼根的组织培养途径
植物的分生组织也可用来进行组织培养。1960年,Morel采用大花蕙兰的茎尖进行组织培养,成功地获得了无病毒植株。近年也有一些作者探索利用白芨的块茎、侧芽、茎尖或根作为外植体的组培体系。何俊蓉等用白芨新鲜块茎的顶芽、余朝秀等用茎尖及侧芽、石云平等用侧芽和块茎、韦卡娅等用块茎,以及田英翠和袁雄强用白芨的幼根,都获得了白芨的组培苗。组织培养的过程一般都是由诱导丛生芽和诱导生根2个步骤构成。 韦卡娅等同时进行了2种组织培养途径的对比实验,结果表明利用幼嫩块茎作为外植体诱导丛生60d才有小芽形成,且分化效率不高;而用种子作为外植体,30d就开始萌动,60d小苗就分化完全.由于所需时间长、分化效率低,因此用块茎、侧芽等作为外植体的方法目前远不如种子萌发方法普遍。